术中冰冻病理，紧急时刻解难题

冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一 定硬度，然后进行切片的技术。在进行病理检查的时候， 首先要对切下的病变组织和器官进行一系列的技术处理， 包括：固定、取材、脱水、浸蜡、包埋、切片和染色等， 通常情况下，要花费 24 小时才能完成整个制片过程，才 能让病理医生通过显微镜进行观察，并作出诊断。该方 法被称作常规石蜡切片，是最常见的病理检测。但，此 种方法从手术切除病灶到进行病理检查，一般都要三天 左右。有时候，外科医生想要在手术的时候就知道组织 病变的性质，才能判断手术的范围，从而更好的进行治疗， 这就需要在手术中进行病理检查。

在外科手术中，快速冰冻切片是一种重要的病理检 查手段，在 15 分钟内，病理医师就会做出确诊，并通过 电话通知外科医师，以便尽快做出下一步的处理。冰冻 切片病理诊断对手术治疗具有重要的参考价值，应力求 准确、快速、可靠。

快速冰冻切片主要用于 : 鉴别病灶是否为肿瘤；对 肿物进行良、恶性的鉴别；明确肿瘤是否向周围淋巴结 及器官转移；通过手术切缘有无肿瘤侵犯，判断手术的 范围是否够大；有助于鉴别术中出现的一些异常情况， 并查明可疑的微组织（例如甲状旁腺，输卵管，输精管等）； 采集新鲜组织供激素受体测定、肿瘤药敏试验、电子显 微镜及分子生物学检测等特定需求。

冰冻切片制备（低温恒冷箱冷冻切片制备法）

1.取材：未能固定的组织，采集材料，不要太大太厚， 厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为 24×24×2mm。

2. 取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴入包埋 剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器， 滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。

3. 将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启 动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

4. 调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上 是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般 在 5 ～ 10um 间。

5. 调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的 调节上，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时， 切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道， 平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取 一载玻片，将其附贴上即可。

6. 根据组织类型，可选用相应的冷冻温度。冷冻箱 内的冷冻温度，主要根据不同的组织而定。例如：切未 经固定的脑组织、肝组织和淋巴结时，冷冻箱内的温度 不能调过低，一般在 -10 ～ 15℃左右，切甲状腺、脾、 肾、肌肉等组织时，可调在 -15 ～ 20℃之间，切带脂肪 的组织时，可调到 -25℃左右，切含有大量脂肪时，可 调到 -30℃。

冰冻切片的快速染色法：冰冻切片附着于载玻片后， 立即置于恒冷箱中用固定液固定，从而使切片中的细胞 中的各种物质在没有任何变化的条件下被固定，核染色 质清晰，核仁明显，其余物质完整。

方法：1. 切片固定 30 秒 -1 分钟 ;2. 水洗 ;3. 染苏 木素 3 ～ 5 分钟 ;4. 分化 ;5. 在碱水中返蓝 20s;6. 伊 红染色 10 ～ 20s;7. 脱水，透明，中性树胶封固。 冰冻组织 1 ～ 2 分钟，切片 1 分钟，固定 1 分钟， 染色共五分钟。总共在 10 分钟内完成快速制片过程，结 果与石蜡切片不相上下。另外，采用的冰冻切片方法也 很多，如甲醇循环的半导体、二氧化碳、半导体、氯乙 烷等，但都很少采用。