细菌鉴定中应注意的问题

由于自然环境的改变、生物界的变异、生物界和自然环境之间的相互作用等原因，导致能够引起人类疾病的新的病原微生物随时可能产生，给临床疾病的诊断和治疗带来极大困难。因此，对病原微生物进行快速准确的检测和鉴定是众多疾病防治工作的首要问题。为了准确地对病原菌进行检测和鉴定，在这过程中应该注意哪些问题呢?下面就让我们一起来了解一下。

待检菌的分离纯化

要想得到好的鉴定结果首先必须要纯化待检菌。常用的方法就是挑取待检菌(单个菌落)接种于富含营养的培养基上，将培养基置于最佳的培养条件下培养。纯化待检菌的目的：一是为了保证鉴定结果的准确性，因为混合培养物的特征试验反应无法鉴定；二是为了给后面的鉴定程序提供足够量的菌体。

注意观察细菌的形态与菌落特征

细菌的形态、染色、培养特性和菌落特征是鉴定细菌的初步依据。形态和染色是鉴定的基础，通过涂片染色结果判断细菌的革兰染色属性，观察细菌的形态大小和排列方式，初步判断细菌种类。其作用体现在：

1.根据革兰染色后在显微镜下观察，可对细菌/真菌进行初步鉴定。

2.鉴定方向和鉴定试剂的选择的依据。

3.是区分球菌或杆菌的方法。

4.是区分革兰染色阳性或阴性的方法。

5.是药敏组合选择的依据。

细菌培养特性及生长特征是细菌生物学特性之一，不同种类细菌可有不同培养特性及生长特征。因此，了解培养特性并观察细菌生长特征对细菌鉴定和鉴别非常有帮助。培养特性主要从细菌的营养要求、生长速度、气体环境、适宜生长温度来判断。观察细菌菌落特征有助于对细菌进行初步鉴定。有些特征是某些细菌所特有的，如肺炎链球菌在血平板上的脐窝状菌落、变形杆菌在血平板上的迁徙性生长、侵蚀艾肯菌的斗笠样菌落、嗜麦芽窄食单胞菌的“猫眼”菌落、以及黏质沙雷菌在麦康凯平板上的粉红色菌落等。

尽可能数量小的试验鉴定

众所周知，细菌鉴定的原则之一就是用最少的试验完成鉴定。2011年世界卫生组织(WHO)对临床微生物实验室提出三项指导方针，其中第一条就是临床微生物实验室尽可能把目标集中在细菌的快速鉴定方面。那如何实现细菌的快速鉴定呢?每一个细菌都有其对应的特征试验分析，选取一个或几个简单、高效的细菌试验类型对细菌进行鉴定无疑是实现对细菌快速鉴定的有效方法。如形态学检查方法，通过对病原菌革兰染色

显微镜检查，可在第一时间向临床报告镜下所见，医生根据镜检结果可初步做出诊断，并以此进行针对性用药。

鉴定方法和技术的选择

近年来，随着自动化鉴定仪器的普及和使用，质谱技术和分子测序技术相继应用于临床。临床细菌的鉴定方法逐渐从传统鉴定流程向自动鉴定系统方向发展。传统鉴定方法(形态学、手工生化、免疫学等)由于检测周期长且部分疑难菌种不易鉴定，不能满足临床诊断时效的需要，尤其是应对菌血症、败血症等重症感染的情况而逐渐被淘汰。但仍有一些即时快速的试验方法，如革兰染色、氧化酶、吲哚试验、触酶等因可即时判断结果而被一直应用。MALDI-TOP质谱技术测定不同菌株的蛋白质组成指纹图谱，并在数据库中查询相匹配的已知菌株，从而实现快速准确的菌种鉴定。该技术操作简单高效，结果准确性高，成本也较为合理，是目前应用广泛的菌株鉴定技术之一。但其数据库的质量对结果准确率有重要影响。分子测序技术是基于微生物基因序列测定的分子生物学鉴定技术，通常不受生长培养基或分离活性的影响，只需分离到纯菌落便可用于分析。优点是准确、快速、高通量，局限性是成本相对较高。只有了解各种细菌鉴定技术的优缺点，才能更好地根据实际情况，选择和运用合适的鉴定方法，快速、准确地对细菌进行鉴定。

鉴定结果的审核

对鉴定结果进行审核是细菌鉴定流程的最后一道工序。这不是简单的对生化反应结果判断阴阳性，也不是抄一下仪器给出的结果。因为每一种鉴定方法都有其局限性，准确率并不能达到100%。所以好的鉴定结果需要我们综合细菌的来源(标本来源)、菌落特征，形态等综合分析。