PCR技术在乙型肝炎检测中的应用

PCR技术是一种用于放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，可以将微量的DNA样本的数量大幅增加，以便在分析和检测中获得足够的信号强度。乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒科，乙型肝炎是我国乃至全世界最主要的传染病之一，HBV存在于患者的血液及各种体液(汗液、唾液、乳汁、阴道分泌物等)中。PCR技术在乙型肝炎检验中具有切实有效的应用，可以准确、快速地检测出人体内HBV的存在和数量，这对于乙型肝炎的诊断、疗效判断和监测均有着重要意义。那么大家知道PCR技术在乙型肝炎检验中都有哪些应用吗?

PCR技术的基本原理

PCR技术的基本过程类似于DNA的天然复制，特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。整个过程由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。具体来讲，这项技术通常是使用一种特定的DNA聚合酶，并加入适当反应物后在体外进行DNA的复制。重复上述循环过程，每一循环获得的“半保留复制链”都可以成为下次循环的模板。因不同PCR仪器而异，每完成一个循环需要数秒至数分钟不等，短时间内就能将靶核酸扩增放大几十万至几百万倍。

乙肝的流行病学特征

1.传染源：主要是慢性无症状乙肝病毒携带者和急、慢性乙型肝炎患者。其传染性的强弱主要与血清病毒复制水平相关。

2.传播途径：HBV主要经血和血制品、母婴、破损的皮肤、黏膜及性接触传播、医源性传播。日常工作或生活接触，如在同一办公室工作、共用办公用品、握手、拥抱、同住一宿舍，同一餐厅用餐和共用厕所等无血液唾液暴露的接触，一般不会传染HBV。经吸血昆虫(蚊、臭虫等)传播未被证实。

3.易感人群：凡未感染过乙型肝炎也未进行过乙肝免疫接种者对HBV均易感。吸毒者、性传播疾病患者、性滥者为高危人群。免疫功能低下者、血液透析患者、部分高危职业等感染HBV的概率亦较大。

PCR技术在乙肝病毒检测中的临床意义

1.HBV DNA定性检测：可以筛查血液和血制品HBV DNA,未明原因而有肝炎症状患者及单项抗HBc阳性者HBV的感染确认与排除。

2.HBV DNA定量检测：(1)判断HBV感染者病毒复制水平。(2)判断HBV感染者的传染

性强弱。(3)抗病毒药物的疗效监测。(4)动态观察乙肝的活动情况。(5)肝移植悲者手术前后的监测。

3.HBV的分型：HBV基因型与疾病严重程度的相关性及基因型与感染临床进程的研究

其他常规检测方法的局限性

而除了PCR技术之外，对HBV病毒还有一些常规的监测方法，比如酶联免疫吸附法和放射免疫分析法等。这些方法可以检测出相关抗体和抗原，但同时也存在着许多的局限性。简单来讲，这些方法对于低病毒载量的样本并不敏感；且由于最初感染期的病毒载量较低，这些方法对于初期感染的样本检测也不够准确；此外，这些方法也不能够区分正在活跃感染和已经治愈无活动感染的悲者，局限性较大。

PCR技术在乙肝检验中的优点和局限性

PCR技术在乙型肝炎检验中的应用有着很多的优点。首先，PCR技术具有高度的敏感性和特异性，可以在极低的HBV病毒DNA负荷下检测到病毒，对感染的早期阶段有着不错的检测效果。其次，PCR技术是一种快速、简便和可重复的检测方法，PCR反应可以在几小时内完成，是一种标准化的流程，能够在普通实验室中进行。最后，PCR技术还可以检测到人所感觉不到的微量病毒，更准确地确定感染者的病毒负载。

虽然PCR技术在乙型肝炎检验中具有很多优点，但其影响因素也不少。首先，PCR技术对样本的准备要求非常高，相关样本必须在正确、规范的条件下收集、运输和存储，否则将影响到PCR反应的结果。其次，如标本或核酸纯化过程中出现的扩增反应抑制物、扩增仪孔间温度的差异以及核酸提取中的随机误差，可造成假阴性结果的出现。又如，以前扩增产物的污染和核酸提取中标本间的交叉污染，也很容易出现假阳性结果。因此，PCR临床应用必须有严格的实验室分区、实验室管理和质量控制措施，只有在充分了解PCR测定的不确定性的基础上，采取相应质控措施，才能确保实验结果的准确性，不致出现重大判断失误。